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固相萃取儀基本原理及操作流程簡略表明
更新時間:2021-09-13   點擊次數:709次

固相萃取儀基本原理及操作流程簡略表明

        固相萃取就是這種制樣設備。它應用液固相色譜的基本理論,選擇選擇性吸收和增白方法對樣品進行包合、分離、清洗,使樣品更加純凈,從而減少殘留物的干擾在檢驗產品上進行檢驗,進一步提高檢驗的準確性。
        固相萃取的原理是采用選擇性吸收和選擇性增白的液相色譜分離的基本原理。比較常見的方法是將待測化學物質按催化劑載體儲存在液體試樣的水溶液中,然后用中等抗壓強度的有機溶劑洗去殘留物,再用少量有機溶劑使待測化學物質快速變白,進而超越清洗和萃取目的快速分離。固相萃取也可以類似于這種簡單的色譜分析來分離整個過程。
         1. SPE 小柱或膜的選擇
        SPE 小柱或膜的尺寸和規(guī)格應由樣品中分析物的濃度值決定。對于濃度值較低的人體樣品,通常應使用較少的固定相填料來純化大體積樣品。
         2. 活動
        純化前,加入填充小柱的溶劑清洗小柱或用5-10ml溶劑清洗濾膜,保持SPE填料濕潤。包裝材料的干燥會降低樣品的保留值。小柱子的不同干燥程度也會損害利用率的再現性。先加入乙醇等水溶性溶劑清洗填料。由于乙醇可以潤濕催化劑載體的表面并滲透到非光學活性硅橡膠的鍵合中,所以硅橡膠更容易被水潤濕;然后加水或緩沖液清洗。創(chuàng)造與測試樣品溶劑相容的自然環(huán)境,提高利用率。
         3. 加載樣本
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         (1)用0.1mol/L酸或堿調至pH9,抽濾上層提純;
         (2)用乙醇、乙腈沉淀蛋白質后,取上清,用水或緩沖液稀釋純化;
         (3)用酸或無機鹽沉淀蛋白質,取上清,調節(jié)pH值,純化;
         (4)超聲15分鐘后加水和緩沖液,取上清進行純化。水流速應控制在1ml/min,過快的水流速不利于被測物與靜止的緊密結合。
         4. 漂洗
        反相 SPE 的清洗溶劑多為水或緩沖液??稍谇逑匆褐屑尤肷倭咳軇?、無機鹽或調節(jié)pH值。加入小柱的清洗液不要超過一根小柱的容量,SPE過濾膜為5-10ml。
         5. 粉飾
        應使用5~10ml離子強度差但能沖洗被測物的洗白溶劑。如果你想要更高的靈敏度,你應該先蒸發(fā)洗白液,然后用液相重組剩余的資產和樣品。身體樣本在洗滌后含有水分,因此可以使用冷凍干燥。儲存能力較差的SPE填料可用小體積、較差的洗白液洗滌分析物,然后使用高旋光性的HPLC分析柱如C18柱對洗白的物質進行分析。如果分析物可以被電離,則可以通過調節(jié)pH值來抑制受試品的電離,以提高分析物在反相SPE填充材料中的儲存。在增白過程中,調節(jié)pH值使其電離,使用不良溶劑進行增白,收集洗白液后,調節(jié)pH值以提高HPLC分析中的實際分離效果。在整個刷白過程中,要減慢水流速度,用2次小流量刷白代替1次大流量刷白,利用率更高。

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